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      H2S 含量測(cè)定試劑盒說明書

      H2S 含量測(cè)定試劑盒說明書
      可見分光光度法 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
      產(chǎn)品內(nèi)容:
      提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。試劑二:液體 15mL×1 瓶,4℃保存。
      試劑三:液體 15mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑四:液體 15mL×1 瓶,4℃保存。
      試劑五:液體 3mL×1 管,4℃避光保存。
      產(chǎn)品說明:
      H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子,存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì),生理濃度的 H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用,并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。
      H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán),亞甲基藍(lán)在
      665nm 處有最大吸收峰,通過測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量。
      需自備的儀器和用品:
      天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì) 1ml 玻璃比色皿、蒸餾水。
      操作步驟:
      一、樣品處理:
      1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10  的比例(建議稱取約 0.1g  組織,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
      2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1  的比例(建議
      500  萬細(xì)胞加入 1mL  提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3  秒,間隔 7
      秒,總時(shí)間 3min);然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
      3. 血清(漿):直接測(cè)定。
      二、測(cè)定步驟: (取 1.5ml 離心管,按照下表操作)
        空白管 測(cè)定管
      樣品(μL)   250
      H2O(μL) 250  
      試劑一(μL) 250 250
      充分震蕩混勻
      試劑二(μL) 250 250
       
      12000rpm,4℃,離心 10min,去上清,留沉淀
      H2O(μL) 500 500
      12000rpm,4℃,離心 10min,去上清,留沉淀
      試劑一(μL) 250 250
      試劑三(μL) 250 250
      充分震蕩混勻
      試劑四(μL) 250 250
      12000rpm,4℃,離心 10min,取上清
      試劑五(μL) 50 50
      混勻,25℃靜置20min,于微量石英比色皿/96孔板中,空白管調(diào)零,測(cè)定665nm吸光值,
      記為A665。
       
      三、H2S 含量計(jì)算公式:
      標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y = 0.0044x,R2 = 0.9988
      (1)組織樣品
      a.按照蛋白濃度計(jì)算
      H2S(μmol/mg prot)= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
      b.按照樣本重量計(jì)算
      H2S(μmol/g)= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3 = 0.727×A665÷W
      (2)液體樣本
      H2S(μmol/L)= A665÷0.0044×V 反總÷V 樣= 727×A665
      (3)細(xì)胞
      H2S(μmol/104 cell)= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè)))×10-3
      =0.727×A665÷細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè))
      V 反總:反應(yīng)總體積,0.8mL;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.25mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:蛋白濃度,mg/mL。
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